人非小细胞肺癌细胞HCC-827的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：HCC-827

细胞类型：人非小细胞肺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：建议第一次按1:2的比例进行传代。

传代情况：每2天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基样本以作过渡对比。如果对比培养效果欠佳，建议直接使用ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，尽快培养至良好状态，注满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞运输的最佳效果。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒后，转移至超净台进行无菌操作。细胞瓶应放入37°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况，并拍摄不同倍率的照片保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基至37°C、5% CO2孵箱中培养；如细胞密度超过80%，即可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS轻柔润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并开始脱落，迅速取回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，并在1000RPM下离心5分钟，去除上清液后补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37°C、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 向培养瓶中添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，并在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1mlag尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 直接将冻存细胞置于-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，则应在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴好防护装备），迅速置入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，轻柔用5ml完全培养基重悬细胞，然后接种至T25培养瓶，放置于37°C, 5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞类型较为特殊，可能在运输过程中容易脱落。如果发生此情况，请将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清以作过渡培养，随后使用胰酶处理细胞（1-2ml），轻轻吹打重悬，消化约1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止反应。进行二次离心，弃去上清后重悬于1-2ml完全培养基中。按照1:2的比例分瓶，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再入37°C、5% CO2培养箱培养。

五、售后条款

1) 细胞问题的重发条件

在以下情况下可考虑重发细胞：

1. 细胞在运输途中遇到问题，例如丢失、瓶身破损或培养液严重漏液。
2. 细胞污染问题需在收到产品后48小时内反馈真实实验结果以便核实。
3. 常温发货后细胞静置24小时或干冰冻存的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）。
4. 如发现细胞复苏后24小时或常温货物静置4小时未开封即出现污染的问题。
5. 如细胞活性存疑，请在收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定活力。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，未反馈情况将被视为产品合格。
7. 4-7天内若出现问题，需提供细胞前三天的照片及操作步骤，以与技术人员沟通判定责任。

2) 不予重发的情况

以下情况不予重发：

1. 因客户操作不当导致的细胞污染。
2. 因客户错误操作导致的细胞状态不佳。
3. 因非推荐培养体系导致的细胞状态异常。
4. 若细胞状态不佳而未提供前三天的照片。
5. 培养过程中有其他处理的细胞。
6. 收到细胞2天内未反馈的情况。
7. 具体情况视而定。